Pengukuran Kalsium dalam Sampel DNA dan DNP
Kandungan kalsium dalam Larutan asam deoksiribonukleat (DNA) dan deoxyribonucleoprotein (DNP) tidak dapat diuji secara langsung karena adanya efek interferensi.
Pemilihan teknik ekstraksi asam dapat memungkinkan pengukuran langsung kalsium dalam DNA dan DNP, atau disebut teknik adisi standar yang digunakan untuk mendapatkan konsentrasi yang lebih tinggi.
Prosedur
Pada metode ini air suling (deionisasi) digunakan pada setiap rangkaian preparasi, glassware yang digunakan harus dicuci menggunakan asam dan dibilas oleh air deionisasi untuk menghindari adanya kontaminasi.
Ekstraksi Asam
Sampel di ekstraksi menggunakan asam, dengan perbandingan 1: 19 mL ( HCl : Larutan Sampel), dengan suhu 700 ° C dalam waktu semalam. Jika terbentuk suspensi, sampel disentrifugasi pada 2000G selama 10 menit untuk mendapat fraksi terlarut. Sekitar 99% DNA dan sekitar 80% protein larut dalam HCl. Konsentrasi DNA DNP sekitar 40% b / b.
Larutan sampel harus dalam konsentrasi DNA antara 50 ppm- 100 ppm, untuk konsentrasi diatas 100 ppm dapat menyebabkan berkurangnya stabilitas walaupun flame fotometer dapat mendeteksi pembacaan ion lebih dari 100 ppm, namun tidak direkomendasikan. Hal ini dikarenakan adanya penumpukan materi di nebulizer yang akan menyebabkan adanya gangguan pada pengukuran selanjutnya. Oleh karena itu diperlukan frekuensi pembersihan nebulizer lebih lanjut dan pengenceran sampel.
Teknik Adisi Standar
Teknik adisi standar adalah teknik penambahan standar yang diketahui konsentrasinya pada sampel yang akan dianalisis, untuk meminimalkan kesalahan yang disebabkan oleh berbagai matrik ( interferensi)
Teknik ini mengukur nilai recorvery dari standar yang diketahui terhadap konsentrasi larutan yang tidak diketahui. Untuk preparasi sampel disiapkan dengan penambahan 1 atau 2 mL larutan standar kalsium.
Untuk konsentrasi kalsium dalam sampel didapat dengan mengurangi konsentrasi gabungan dikurangi dengan konsentrasi standar. Hasil yang didapat di kurangi konsentrasi blanko HCl .
Grafik Standar
Atur Flame fotometer sesuai dengan Kalibrasi MultiPoint / Single Ion tercantum di Manual Instalasi dan Operasi BWB Technologies untuk mengukur emisi potassium. Aspirasikan larutan standar kemudian sesuaikan kontrol sampai nol dan pembacaan maksimum diperoleh stabil. Aspirasikan larutan standar konsentrasi intermediet kemudian buat grafik dari data emisi yang diperoleh (dikenal dengan RAW di BWB the flame photometer) terhadap konsentrasi larutan standar.
Sumber : https://www.bwbtech.com/calciumindnadnp
